Método de identificación de capa delgada
Tome 0.5 g de epimedium medicinal en polvo o una cantidad apropiada de extracto, agregue 10 ml de etanol, sumerja durante 30 minutos, filtre y evapore el filtrado. Añadir 1 ml de etanol para disolver el residuo, que es la solución de prueba. La sustancia de referencia de icariina se pesó, se disolvió en metanol y se diluyó a 0,1 mg / ml, que era la solución de referencia. Pipetee 10 μl de cada una de la solución de prueba y la solución de referencia, respectivamente, en una placa de capa fina de gel de sílice H de la misma carboximetilcelulosa sódica como aglutinante, con acetato de etilo-butanona-ácido fórmico-agua (10: 1: 1 : 1) como agente de revelado, desenrollado, retirado, secado al aire y colocado en una lámpara UV (365 nm) para su examen. En el cromatograma de la muestra de prueba, aparece la misma mancha roja oscura en la posición correspondiente al cromatograma de la sustancia de referencia; rociado con tricloración La solución de prueba de aluminio se aplicó nuevamente con una lámpara UV (365 nm) para revelar el mismo punto fluorescente rojo anaranjado.
2. Determinación espectrofotométrica de flavonoides totales en Epimedium y sus extractos
El producto de referencia icariin se pesó con precisión y se formuló en una solución estándar de 10 µg / ml con metanol. Pese con precisión la cantidad de polvo de este producto (equivalente a aproximadamente 1 mg de icariina), aplique 25 ml de metanol durante 30 minutos, diluya en un matraz volumétrico de 50 ml, filtre con una membrana microporosa de 0,45 μm, es decir, pruebe la solución del producto. La solución de prueba y la solución de referencia se tomaron por separado y la absorbancia se midió a una longitud de onda de 270 nm con el reactivo como blanco y se obtuvo el cálculo.
3. Determinación de icariina en Epimedium y su extracto por HPLC
Condiciones cromatográficas y prueba de idoneidad del sistema: columna ODS2 5u C18 (4 mm × 150 mm); Fase móvil: acetonitrilo-agua (30:70); longitud de onda de detección: 270 nm; caudal: 0,8 ml / min. El número de placas teóricas no es inferior a 1500 basado en icariin.
Preparación de la solución de referencia: El producto de referencia icariina se pesó con precisión y se preparó una solución de 0,1 mg / ml con metanol.
Preparación de la solución de prueba: pese con precisión la cantidad apropiada de este producto en polvo (equivalente a aproximadamente 1 mg de icariina), aplique 25 ml de metanol durante 30 minutos, diluya a 50 ml en un matraz volumétrico, utilice un filtro microporoso de 0,45 μm. La solución de prueba es la filtración de membrana.
Método de ensayo: se inyectaron 10 μl de cada solución de muestra y solución de referencia en el instrumento de HPLC, y el área se calculó mediante un método estándar externo.